כרומטוגרפיה של שכבה דקה היא שיטת ניתוח כימית המבוססת על שימוש בשכבת ספיגה בעובי 0.1-0.5 מ מ כשלב נייח. ניתן להשתמש בשיטת TLC בתחומים שונים ומאפשרת קביעת מגוון רחב של תרכובות כימיות.
עקרון השיטה
שיטת הכרומטוגרפיה בשכבה דקה נולדה מכרומטוגרפיית נייר והניסויים הראשונים נערכו בשנות ה -80 של המאה ה -19. השימוש הפעיל בניתוח זה החל רק לאחר 1938.
טכניקת ה- TLC כוללת שלב נייד (eluent), שלב נייח (sorbent) וניתוח. השלב הנייח מוחל ומתקבע על צלחת מיוחדת. הצלחת יכולה להיות עשויה מזכוכית, אלומיניום או פלסטיק - מדובר במצעים רב פעמיים אותם יש לשטוף היטב, לייבש ולהכין למריחה של חומר הספיגה לאחר כל שימוש. אפשר גם להשתמש בלוחות נייר שנפטרים לאחר השימוש.
לרוב משתמשים בג'ל סיליקה כשלב הנייח, אך ניתן להשתמש בחומרים ממיסים אחרים, למשל תחמוצת אלומיניום. כאשר משתמשים בחומר ספיגה כזה או אחר, יש להקפיד על טכנולוגיה על מנת שהתוצאה תהיה מדויקת, למשל, מכיוון שג'ל סיליקה יכול לתת תוצאה שגויה אם האוויר במעבדה לח מדי.
ממיסים משמשים כשלב הנייד, למשל, מים, חומצה אצטית, אתנול, אצטון, בנזן. הבחירה בממיס חייבת להיעשות באחריות, מכיוון שתוצאת הכרומטוגרפיה תלויה ישירות בתכונותיה (צמיגות, צפיפות, טוהר). ממס בודד נבחר לכל דגימה מנותחת.
אָנָלִיזָה
יש לדלל את הדגימה בממיס. אם לא מתרחשת פירוק מוחלט ונותרו יותר מדי זיהומים, ניתן לנקות את הדגימה על ידי מיצוי.
יישום הדגימה על הצלחת יכול להיעשות באופן אוטומטי או ידני. יישום אוטומטי משתמש בשיטת מיקרוספריי כאשר כל דגימה מרוססת על האזור המתאים במצע. ליישום ידני משתמשים במיקרופיפטה. סימני עיפרון מונחים על הצלחת לכל דגימה. כל דגימה מוחלת עם נימים על הצלחת בשורה אחת במרחק מספיק מהסימנים כדי לא להגיב עם פחמן מהעופרת.
את הצלחת מניחים בכלי, שבתחתיתו מוזגים את חומר האלואנט. התומך ממוקם עם קצה אחד לתוך הכלי עד לקו המסומן. הספינה סגורה היטב כדי למנוע אידוי של השלב הנייד. תחת פעולת כוחות נימים, המתחיל מתחיל לעלות במעלה השכבה הסופגת. כאשר האלואנט מגיע לרמה מסוימת, מוציאים את הצלחת מהכלי ומייבשים.
אם אין לחומר הרצוי צבע, אז הוא לא נראה על המצע. לכן מבוצעת הדמיה - עיבוד הצלחת עם אדי יוד או צבעים אחרים.
לאחר עיבוד כזה, התוצאה מוערכת. אזורים צבעוניים בעוצמה משתנה מופיעים על חומר הספיגה. כדי לקבוע חומר (או קבוצת חומרים) משווים את האזורים הצבעוניים, גודלם, עוצמתם וניידותם עם מדגם התייחסות.
נעשה שימוש נרחב בשיטת TLC מכיוון שהיא מהירה, זולה, מדויקת, אינטואיטיבית, אינה דורשת ציוד מורכב וקל לפרש אותה.
